液相色谱仪分配系数与组分、流动相和固定相的热力学性质有关,也与温度、压力有关。在不同的色谱分离机制中,K有不同的概念:吸附色谱法为吸附系数,离子交换色谱法为选择性系数(或称交换系数),凝胶色谱法为渗透参数。但一般情况可用分配系数来表示。
高效液相色谱仪的记录样品通过检测器吸光度变化引起的电信号变化,从而产生色谱图,最终结果取决于后期色谱数据处理系统的数据处理。以下是两种常用的高效液相色谱仪数据处理方法。光谱处理后可以制作校正曲线。校正曲线是数据处理的重点。它是一个标准,使信息和数据的标准光谱图处理样品光谱图。高效液相色谱仪的校正是通过分析制备的标准样品来确定计算绝对组分浓度的响应系数的过程。
1.外标法:外标法是在空白样品中加入一定量的标准物质作为对照样品,与未知样品同时进行样品处理和检测,并计算出被检测成分的浓度的定量方法。根据对照品响应值与标准品浓度函数的关系,测定未知试样中的成分。
2.内标法:内标法是将一定重量的纯物质作为内标物加入一定量的被测样品混合物中,对含有内标物的样品进行高效液相色谱仪分析,测定峰面积和相对含量。分别测定内标物和受试物的有效校正系数,并按公式计算受试物的含量。
两种适合的数据处理方法的差别为高效液相色谱仪:内部标准方法是将标准的标准物质作为要求的内部条件,并以合适的操作条件对样品进行严格的试验和试验结果的检验,但对样品的精确操作条件和试验结果的分析必须是严格的,而对样品的内部标准则不需要对样品进行严格的校正。