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高效液相色谱分析时如何选择流动相?

发布时间:2022-08-24      点击次数:80
  高效液相色谱是色谱法的一个重要分支,以液体为流动相,采用高压输液系统,将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱,在柱内各成分被分离后,进入检测器进行检测,从而实现对试样的分析。该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术应用。
  高效液相色谱仪分析时流动相的选择原则:
  1.选择色谱醇的溶剂作为流动相
  不要随意加满溶剂瓶。作为分析流动相,应避免不必要的浪费,防止污染环境,危害身体健康。应该根据样哦数量,计算需要使用的溶剂体积,添加适量流动相到试剂瓶中作为流动相。因为有些有机溶剂长期放置易变质,比如四氢呋喃在光照下就容易变质,甲醇或乙醇长期放置会生成酯类,乙腈水溶液会分解为醋酸与氨,在分析时导致基线抬高,对一些分析,特别是质谱分析造成影响。
  高效液相色谱流动相的选择原则
  2.配置某些酸或碱性流动相时要考虑色谱柱的使用pH范围
  有些酸并不适宜作为流动相,如盐酸、长期使用可能损坏泵及相关的钢制管线。注意选择合适的截止波长的溶剂作为流动相。
  紫外分析时,样品的检测波长至少应大于所用溶剂的截止波长20nm上。
  3.配置的盐溶液一定用滤膜过滤
  常规液相用0.45µm滤膜过滤,高效液相色谱使用0.2µm滤膜过滤。水或缓冲盐溶液好置于棕色瓶中,以防长菌,阻塞溶剂过滤器,降低泵的操作性能。质谱分析不能使用不挥发性盐作为流动相。使用挥发性盐作为流动相时,在保证分析的条件下,流动相中的盐尽量保持低浓度。
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