高效液相色谱从原理上与经典的液相色谱没有本质的差别,它的特点是采用了高压输液泵、高灵敏度检测器和高效微粒固定相,适于分析高沸点不易挥发、分子量大、不同极性的有机化合物。
使用高效液相色谱时,液体待检测物被注入色谱柱,通过压力在固定相中移动,由于被测物种不同物质与固定相的相互作用不同,不同的物质顺序离开色谱柱,通过检测器得到不同的峰信号,最后通过分析比对这些信号来判断待测物所含有的物质。高效液相色谱作为一种重要的分析方法,广泛地应用于化学和生化分析中。
高效液相色谱跑梯度如何平衡基线?
首先,当梯度完成时,基线漂移是正常的,但是基线漂移的严重性可以通过以下措施来改善:
1.梯度前,最好用纯有机溶剂冲洗高效液相色谱柱,或使用新高效液相色谱柱,以防止高效液相色谱柱中的残留物导致基线漂移。
2.试剂纯度优选为普通色谱纯试剂。如果纯度不够,梯度过程中也会出现基线漂移。
3.控制室或柱温,防止温度波动
4.注射前,进行溶剂空白试验。如果基线漂移严重,可使用该空白进行扣除,基线漂移将得到改善。