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高效液相色谱系统常用的三种实验方法介绍

发布时间:2022-03-16      点击次数:563
  高效液相色谱系统使用液体作为流动相,采用高压输液系统将不同极性的单一溶剂或流动相,如不同比例的混合溶剂和缓冲液,泵入装有固定相的色谱柱中。色谱柱中的组分分离后,进入检测器进行检测,从而实现样品的分析。
  高效液相色谱系统根据分离机制的不同,HPLC原理可分为离子交换色谱法、分子排阻色谱法及液液分配色谱法。
  1、离子交换高效液相色谱法:
    固定相是离子交换树脂。树脂上可电离离子与流动相中具有相同电荷的离子及被测组分的离子进行交换,根据各离子与离子交换基团具有不同的电荷吸引力而分离。
  2、分子排阻色谱法:
    分子排阻色谱法又称凝胶色谱法,它是按照分子尺寸大小顺序进行分离的一种色谱方法。分子排阻色谱法的固定相凝胶是一种多孔性的聚合材料,有一定的形状和稳定性,利用分子筛对分子量大小不同的各组分排阻能力的差异而完成分离。根据所用流动相的不同,凝胶色谱法可以分为两类:即用水溶剂做流动相的凝胶过滤色谱法(GFC)与用有机溶剂如THF做流动相的凝胶渗透色谱法(GPC)。
  3、液液分配色谱法:
    固定相为液体,根据被分离的组分在流动相和固定相中的溶解度不同而分离。依固定相和流动相的极性不同可分为正相色谱法和反相色谱法。正相色谱法采用极性固定相,流动相为相对非极性的疏水性溶剂,常用于分离中等极性和极性较强的化合物;高效液相色谱系统法一般用非极性固定相,流动相为水或缓冲溶液,适用于分离非极性和极性较弱的化合物。
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