HPLC色谱概述 液相色谱法(HPLC)是上个世纪七十年代迅速发展起来的一项快速的分析分离技术,是现代分离测试的重要手段。
色谱法的分离原理是:溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时,由于与固定相(station phase)发生作用(吸附、分配、排阻、亲和)的大小、强弱不同,在固定相中滞留时间不同,从而先后从固定相中流出。又称为色层法、层析法。
HPLC是在经典的液相色谱法基础上发展起来的,其以液体作为流动相,并采用颗粒极细的固定相的柱色谱分离技术。其分离机制与常规柱色谱相同,但填料更加精细,需高压泵推动,柱效高,分析速度快。
与气相色谱不同的是液相色谱中流动相亦参与组分的分离过程,其组成、比例和pH值可灵活调节,分离模式多样。在实际操作中主要通过改变流动相的组成来调节样品在色谱柱的保留值和选择性,从而使不同样品得到分离。
液相色谱法的应用范围十分广泛,对样品的适用性广,不受分析对象挥发性和热稳定性的限制,几乎所有的化合物包括高沸点、极性、离子型化合物和大分子物质均可用液相色谱法分析测定,因而弥补了气相色谱法的不足。在目前已知的有机化合物中,可用气相色谱分析的约占20%,而80%则需用液相色谱来分析。
液相色谱基线漂移的原因
(1)柱的温度波动。即使是微小的温度变化也会导致基线波动。通常影响差异检测器、电导检测器、UV检测器或其它光电类检测器的较低灵敏度。
(2)色谱流动相不均匀流动相条件变化,引起的基线漂移大于温度变化引起的基线漂移。
(3)污染或气体循环池。
(4)探测器出口堵塞。(高压导致循环水池窗口的爆裂,产生噪声基线)。
(5)不正确的流量比或流量变化。
(6)柱的平衡是缓慢的,特别是当移动相发生变化时。
(7)由低质量的溶剂污染、变质或制备。
(8)个样品具有较强的保留力(高K‘值)至汕头峰。