DNA合成仪的使用方法操作步骤

　　

　　以亚磷酰胺寡核苷酸合成为例介绍该类仪器的一般操作步骤。亚磷酰胺DNA合成的试剂有：保护碱基的5/—DMT，A、G、C、T亚磷酰胺单体，四唑偶联催化剂，乙酐，N—甲基咪唑封闭试剂，三氯乙酸(TCA)脱保护溶液，12氧化混合物，乙腈清洗溶剂，氨水切除溶液。使用步骤如下：

　　

　　1)仔细检查合成仪上所有试剂瓶中的试剂量，必要时换掉试剂瓶，特别注意乙腈的量，因为该溶剂用量较大。

　　

　　2)将标记好的清洁的收集瓶装在合成仪上。

　　

　　3)将要合成的DNA序列输入合成仪。

　　

　　4)检查选择的合成步骤是否正确。

　　

　　5)选择结束方法：TritylOffAuto是仪器的原始状态，若打算以5，—DMT基团连接纯化寡核苷酸，将其转变为TritylOnAuto结束状态。

　　

　　6)选择结束方法，一般为系统的原始状态。

　　

　　7)在每个柱监视器的Username下，输入你所希望的保存名字。

　　

　　8)以代码代替相应的DNA序列标记每一个收集瓶。

　　

　　9)打印出每一个柱设置的详细资料。

　　

　　10)检查打印出来的资料是否正确。

　　

　　11)运行StartColumn步骤检查每一个柱的位置，确保合成仪上合成柱处于正确的位置。

　　

　　12)检查连接在合成仪上的溶剂残留(废液瓶)是否充满。

　　

　　13)如果分部收集器用来收集每个DMT脱保护步骤的流出物，确保试管充分清洁干净，并打开分部收集器，确保DMT废液管路通向分部收集器。

　　

　　14)启动循环，运行开始程序清洗试剂管路，除去原来的试剂。

　　

　　注意：TritylOnAuto表示在合成寡核苷酸的5’端核苷酸带有一个DMT，并将其从固相载体上切下来，储存在收集瓶中；TritylOffAuto表示在合成寡核苷酸的5，端核苷酸没有保护基团，将其从固相载体上切下来，储存在收集瓶中；TritylOnManual表示合成寡核苷酸的5’端核苷酸带有一个DMT，寡核苷酸没有从固相载体上切下来，而是保留在合成柱中；TritylOffManual表示在合成寡核苷酸的5，端核苷酸没有保护基团，寡核苷酸没有从固相载体上切下来，而是保留在合成柱中。