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流动相和过滤器在高效液相色谱中的作用

发布时间:2021-08-23      点击次数:321
   高效液相色谱法的应用范围十分广泛,对样品的适用性广,不受分析对象挥发性和热稳定性的限制,几乎所有的化合物包括高沸点、极性、离子型化合物和大分子物质均可用高效液相色谱法分析测定,因而弥补了气相色谱法的不足。下面讲讲流动相和过滤器在高效液相色谱中的作用:
  1、流动相
  流动相就比如人体的血液,其质量直接影响到整个系统的正常运行与否。
  应该使用HPLC级的溶剂,不能互相混溶的溶剂不可以直接切换!一般在水相和与其不混溶的溶剂切换时,使用异丙醇作为过渡溶剂。
  注意溶剂的截止波长。截止波长是指该溶剂可以在紫外检测器中使用的低波长,低于该波长后,溶剂会有很强的紫外吸收,从而影响极限的稳定性、干扰对所分析物质的检测。
  HPLC所使用的水必须是新鲜的和经过0.45μm滤膜过滤过的。建议每天更换新鲜的水。长期不用时,必须把使用水的管路用有机溶剂置换,防止长霉。
  仪器使用完后要采用适当的溶剂冲洗等方法维护色谱柱和系统。如果使用了缓冲盐一定先将盐要冲洗干净。
  仪器长期不用时,不建议使用纯乙腈封存。因为乙腈有生成聚合物的趋势。建议使用甲醇、甲醇/水或乙腈/水封存。
  当有流路堵塞时,可以尝试将之反接后冲洗。污染的溶剂或溶剂瓶里的藻类生长将会缩短溶剂过滤器的使用寿命,并且影响泵和系统的的性能。这在水溶剂或磷酸盐缓冲液(pH4至7)中尤其如此。
 
  2、过滤器
  检查溶剂过滤器
  查看过滤器是否变色(尤其是盛放水相的溶剂瓶)–拧开脱气机出口或比例阀入口管线,此时溶剂会因为重力流出。当脱气机或溶剂过滤头堵塞时,溶剂会流出不畅或不流出–临时取下过滤器,检查柱前压力是否正常。
  清洁溶剂过滤器
  将堵塞的溶剂过滤器从瓶头组件中拿下,用水冲洗残留之溶剂,然后将过滤器放在装有浓硝酸(35%左右)的烧杯里浸一小时。用二次蒸馏水彻底冲洗过滤器至水为中性可以把过滤器放在塑料烧杯内超声清洗。但是不可使用玻璃器皿将过滤器重新装好。
  建议:定期清洗溶剂过滤器及溶剂瓶(可以高温灭菌),每三个月至少清洗一次。
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