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HPLC色谱对流动相的一般要求,常见故障及维护

发布时间:2021-08-18      点击次数:170
  色谱法的分离原理是:溶于流动相中的各组分经过固定相时,由于与固定相发生作用(吸附、分配、排阻、亲和)的大小、强弱不同,在固定相中滞留时间不同,从而先后从固定相中流出。又称为色层法、层析法。
 
  高效液相色谱法的应用范围十分广泛,对样品的适用性广,不受分析对象挥发性和热稳定性的限制,几乎所有的化合物包括高沸点、极性、离子型化合物和大分子物质均可用高效液相色谱法分析测定,因而弥补了气相色谱法的不足。在目前已知的有机化合物中,可用气相色谱分析的约占20%,而80%则需用高效液相色谱来分析。
 
  与气相色谱不同的是液相色谱中流动相亦参与组分的分离过程,其组成、比例和pH值可灵活调节,分离模式多样。在实际操作中主要通过改变流动相的组成来调节样品在色谱柱的保留值和选择性,从而使不同样品得到分离。
 
  HPLC色谱对流动相的一般要求,常见故障及维护:
 
  流动相就比如人体的血液,其质量直接影响到整个系统的正常运行与否。
 
  应该使用HPLC级的溶剂,不能互相混溶的溶剂不可以直接切换!一般在水相和与其不混溶的溶剂切换时,使用异丙醇作为过渡溶剂。
 
  注意溶剂的截止波长。截止波长是指该溶剂可以在紫外检测器中使用的低波长,低于该波长后,溶剂会有很强的紫外吸收,从而影响极限的稳定性、干扰对所分析物质的检测。
 
  HPLC所使用的水必须是新鲜的和经过0.45μm滤膜过滤过的。建议每天更换新鲜的水。长期不用时,必须把使用水的管路用有机溶剂置换,防止长霉。
 
  仪器使用完后要采用适当的溶剂冲洗等方法维护色谱柱和系统。如果使用了缓冲盐一定先将盐要冲洗干净。
 
  仪器长期不用时,不建议使用纯乙腈封存。因为乙腈有生成聚合物的趋势。建议使用甲醇、甲醇/水或乙腈/水封存。
 
  当有流路堵塞时,可以尝试将之反接后冲洗。污染的溶剂或溶剂瓶里的藻类生长将会缩短溶剂过滤器的使用寿命,并且影响泵和系统的的性能。这在水溶剂或磷酸盐缓冲液(pH4至7)中尤其如此。
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