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DNA合成仪的使用方法

发布时间:2016-08-18      点击次数:239
        DNA合成仪的使用方法
  
  亚磷酰胺寡核苷酸合成为例介绍该类仪器的一般操作步骤。亚磷酰胺DNA合成的试剂有:保护碱基的5/—DMT,A、G、C、T亚磷酰胺单体,四唑偶联催化剂,乙酐,N—甲基咪唑封闭试剂,三氯乙酸(TCA)脱保护溶液,12氧化混合物,乙腈清洗溶剂,氨水切除溶液。使用步骤如下:
  
  1)仔细检查合成仪上所有试剂瓶中的试剂量,必要时换掉试剂瓶,特别注意乙腈的量,因为该溶剂用量较大。
  
  2)将标记好的清洁的收集瓶装在合成仪上。
  
  3)将要合成的DNA序列输入合成仪。
  
  4)检查选择的合成步骤是否正确。
  
  5)选择结束方法:TritylOffAuto是仪器的原始状态,若打算以5,—DMT基团连接纯化寡核苷酸,将其转变为TritylOnAuto结束状态。
  
  6)选择结束方法,一般为系统的原始状态。
  
  7)在每个柱监视器的Username下,输入你所希望的保存名字。
  
  8)以代码代替相应的DNA序列标记每一个收集瓶。
  
  9)打印出每一个柱设置的详细资料。
  
  10)检查打印出来的资料是否正确。
  
  11)运行StartColumn步骤检查每一个柱的位置,确保合成仪上合成柱处于正确的位置。
  
  12)检查连接在合成仪上的溶剂残留(废液瓶)是否充满。
  
  13)如果分部收集器用来收集每个DMT脱保护步骤的流出物,确保试管充分清洁干净,并打开分部收集器,确保DMT废液管路通向分部收集器。
  
  14)启动循环,运行开始程序清洗试剂管路,除去原来的试剂。
  
  注意:TritylOnAuto表示在合成寡核苷酸的5’端核苷酸带有一个DMT,并将其从固相载体上切下来,储存在收集瓶中;TritylOffAuto表示在合成寡核苷酸的5,端核苷酸没有保护基团,将其从固相载体上切下来,储存在收集瓶中;TritylOnManual表示合成寡核苷酸的5’端核苷酸带有一个DMT,寡核苷酸没有从固相载体上切下来,而是保留在合成柱中;TritylOffManual表示在合成寡核苷酸的5,端核苷酸没有保护基团,寡核苷酸没有从固相载体上切下来,而是保留在合成柱中。
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