制备型液相色谱的分离目的是从混合物中得到纯物质

　　制备型液相色谱通常都被认为和大容量色谱柱和高流速有关联的。然而并不是以设备的大小和系统消耗的流动相的多少来决定制备液相色谱，而是依据分离目的来决定。分析液相的目的是给一种组份进行定量和定性。制备液相的目的是对产品的单体进行提取和纯化。与传统的纯化方法（如蒸馏、萃取）比较，制备液相是一种更有效的分离方法，因此被广泛应用在样品和产品的提取和纯化上。随着合成、植化、生化和制药等领域对高纯度组份的需求不断增加，制备型液相色谱仪应用的领域也在迅速的扩大发展。

　　制备型液相色谱的分离目的是从混合物中得到纯物质。为了缩短分离时间和提高分离效率，制备型液相色谱的的进样品量很大，导致色谱柱的分离负荷相应加大，因此必须加大色谱柱填料，增大柱内径和柱长，使用的流动相相对增多。然而，当色谱柱上的样品负载加大时，往往会导致柱效急剧下降而得不到纯产品。制备型液相色谱要解决容量与柱效之间的矛盾，对重现性也要考虑。从经济上来说，要少用填料，少用溶剂，尽可能多的得到产品。

　　一、样品的前处理：

　　制备型液相色谱柱分离的样品多，比分析型液相色谱柱更容易受污染，样品前处理非常必要。

　　二、TFA在缓冲液中的作用：

　　1、TFA起到类似离子对的作用，一般浓度在0.05%～0.1%。浓度过高会使溶液偏酸，长时间使用可能影响色谱柱寿命。

　　2、TFA可抑制硅胶表面的硅醇基，改善碱性化合物的峰形。若0.1%TFA分离不好，可加大浓度到0.2%，但用完后要及时冲洗色谱柱。

　　3、走梯度时走成基线漂移，但对制备影响不大。

　　三、降低柱压的方法：

　　采用1%乙酸水溶液和甲醇二元梯度。

　　四、提高检测下限的方法：

　　1、如果是等度洗脱，一定要改成单元等度。

　　2、尽量采用乙腈－水系统洗脱。乙腈紫外吸收小，相同条件下噪音小。

　　五、用水要求：

　　不含金属离子和细菌。

　　六、分析方法开发中流动相的调整原则：

　　1、由强到弱：

　　一般先用90%的乙腈或甲醇－水或缓冲溶液进行试验，可很快得到分离结果，然后根据出峰情况调整有机溶剂（乙腈或甲醇）的比例。

　　2、三倍规则：

　　每减少10%的有机溶剂（乙腈或甲醇）的量，保留因子增加约3倍，此为三倍规则。调整时注意观察各个峰的分离情况。

　　3、粗调转微调：

　　当分离达到一定程度时，应将有机溶剂（乙腈或甲醇）10%的改变量调整为5%，并据此规则逐渐降低调整率，直至各组分的分离情况不再改变。